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常见溶液、缓冲液配制方法

常见溶液、缓冲液配制方法注意事项

试剂使用完毕后再进行配置,配置时把原有的试剂丢弃,或者转移到其他的小瓶中自用。

配置完毕后要写明配置人和配置时间,用美纹纸进行标记。

同时在瓶盖和瓶身上面进行标记。

本实验方案所说的M是mol/L的简称。

20×PBS缓冲液(0.2 M)

储存温度:室温存放

配置方法(1 L):

每次配置1 L,装到1L蓝盖瓶中,用1 L烧杯溶解调节pH,蓝盖瓶中原来的溶液丢弃清洗干净,所有容器用蒸馏水清洗干净,。

160 g NaCl、4 g KCl、28.4 g Na2HPO4【或者71.6 g Na2HPO4▪12H2O】、4.8 g KH2PO4溶解于800 mL蒸馏水中。调节pH至7.4。

用量筒定容至1 L,121摄氏度灭菌后,室温放置。

做标记:

贴上标签,写明配置人和配置时间。

1×PBS缓冲液(pH 7.4)(0.01 M)

利用20×PBS缓冲液稀释20倍配制。

1L中含有:8 g NaCl、0.2 g KCl、1.42 g Na2HPO4、0.24 g KH2PO4,pH 7.4。

137 mM NaCl、10 mM Na2HPO4、1.76 mM KH2PO4、2.7 mM KCl

备注:通常磷酸盐缓冲液的浓度是指缓冲液中磷酸根离子的浓度,但是PBS中的磷酸根经计算之后并不是标注的浓度,这里的浓度是按照约定俗成的浓度来标注。

1 M Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)

储存温度:室温存放

配置方法(500 mL):

每次配置500 mL,用1 L烧杯溶解调节pH,所有容器用超纯水清洗干净,500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃,清洗干净。

称取60.5 g Tris碱 [Tria-base] [三羟甲基氨基甲烷],加入400 mL超纯水。用浓盐酸调节pH至8.0。

加蒸馏水定容至500 mL,加入到1 L的蓝盖瓶中。

做标记:

贴上标签,写明配置人和配置时间。

1 M Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)

每次配置500 mL,用1 L烧杯溶解调节pH,所有容器用超纯水清洗干净,500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃,清洗干净。

称取60.5 g Tris碱 [Tria-base] [三羟甲基氨基甲烷],加入400 mL超纯水。用浓盐酸调节pH至7.5。

加蒸馏水定容至500 mL。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

0.5 M EDTA缓冲液(pH 8.0)

每次配置500 mL,用1 L烧杯溶解调节pH,所有容器用超纯水清洗干净,500 mL蓝盖瓶中原来的溶液丢弃,清洗干净。

称取73.06 g EDTA (乙二胺四乙酸),加入400 mL超纯水(不溶),用5 M NaOH调节pH至8.0,用蒸馏水定容至500 mL。

或者

称取93.06 g 乙二胺四乙酸二钠盐二水,加入450 mL蒸馏水,用5 M NaOH调节pH至8.0,用蒸馏水定容至500 mL。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

10%SDS溶液

每次配置200 mL,所有容器必须要用超纯水清洗干净,原来瓶子中的溶液丢弃,配置用超纯水配置。

准确称取20 g SDS粉末(注意配置的时候带口罩,SDS粉末容易散开)加入到洗干净的烧杯中,加入180 mL超纯水,用磁力搅拌器搅拌混匀,利用洗干净的玻璃量筒定容到200 mL,装入500 mL玻璃蓝盖瓶中。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

CTAB抽提液

每次配置500 mL,所有容器必须要用超纯水清洗干净,原来瓶子中的溶液丢弃,配置用超纯水配置。

准确称取25 g NaCl和10 g的CTAB加入到洗干净的1 L的玻璃烧杯中,加入400 mL超纯水,加入50 mL 1 M Tris-HCl (pH 8.0),加入20 mL 0.5 M EDTA缓冲液,用转子搅拌均匀,使得CTAB和NaCl溶解。利用洗干净的玻璃量筒定容到500 mL。

贴上标签,写明配置人和配置时间。。

室温中可以保存几年稳定,分装到100 mL的小瓶中使用。

2% (w/v) CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)、100 mM Tris-HCl,pH 8.0、20 mM EDTA,pH 8.0、5% NaCl(有文献报道是1.4 M)

饱和硫酸铵溶液(4℃)

在70水中加入硫酸铵不断搅拌至饱和,将饱和硫酸铵溶液利用布氏漏斗将不溶物过滤出来,在4摄氏度静置,直至有晶体析出为止(过饱和),上清即为饱和硫酸铵溶液,4摄氏度冰箱保存。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

TE Buffer(pH 8.0)

10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0【用于保存DNA更稳定】

将100 mL的蓝盖瓶中原来剩余的TE Buffer倒掉,用蒸馏水冲洗干净。

准确吸取0.5 mL 1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.1 mL 0.5 M EDTA-Na (pH 8.0),49.5 mL超纯水,加入到洗净的100 mL的蓝盖瓶中。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

高盐TE缓冲液

10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,1 M NaCl,pH 8.0

储存温度:室温中可以保存几年稳定

配置方法(50 mL):

将100 mL的蓝盖瓶中原来剩余的缓冲液倒掉,用蒸馏水冲洗干净。

准确吸取0.5 mL 1 M Tris-HCl (pH 8.0)、0.1 mL 0.5 M EDTA-Na (pH 8.0),49.0 mL超纯水、2.9 g NaCl加入到洗净的100 mL的蓝盖瓶中。

贴上标签,写明配置人和配置时间。

70%乙醇

储存温度:室温存放

配置方法(400 mL):

原来瓶子中的无水乙醇丢弃,并用蒸馏水冲洗干净蓝盖瓶。

用量筒准确量取280 mL无水乙醇,加入到500 mL蓝盖瓶中,再量取120 mL蒸馏水加入蓝盖瓶。

或者

用量筒准确量取295 mL 95%乙醇,加入到500 mL蓝盖瓶,再量取105 mL的蒸馏水加入蓝盖瓶。

做标记:

贴上标签,写明配置人和配置时间。

6 M Urea(6 mol/L尿素)

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取72.1 g尿素,加入到洗干净的500 mL烧杯中,加入150 mL蒸馏水将尿素溶解,利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净,利用两层滤纸对溶解的尿素进行过滤,过滤两遍。【尿素杂质较多,这个步骤是必须的】

将过滤后的6 M Urea加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

8 M Urea(8 mol/L尿素)

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取96.1 g尿素,加入到洗干净的500 mL烧杯中,加入150 mL蒸馏水将尿素溶解,利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净,利用两层滤纸对溶解的尿素进行过滤,过滤两遍。【尿素杂质较多,这个步骤是必须的】

将过滤后的8 M Urea加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

6 M GdmCl(6 mol/L盐酸胍)

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取114.6 g盐酸胍,加入到洗干净的500 mL烧杯中,加入150 mL蒸馏水将盐酸胍溶解,利用量筒定容到200 mL。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净,利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤,过滤两遍。【盐酸胍杂质较多,这个步骤是必须的】

将过滤后的8 M GdmCl加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

5 M NaOH(5 mol/L NaOH溶液)

储存温度:RT

配置方法(100 mL):【5 M NaOH不能长期存放,NaOH会跟玻璃反应生成硅酸钠,还会跟空气中的CO2反应,因此高浓度NaOH仅用于调节pH,其他需要高纯度NaOH的单独配置】

称取20.0 g氢氧化钠,加入到洗干净的200 mL烧杯中,加入80 mL蒸馏水溶解,利用量筒定容到100 mL,加入到洗干净的100 mL的蓝盖瓶中【蓝盖瓶中原来的NaOH溶液用大量蒸馏水稀释后丢弃】。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

2 M HCl(2 mol/L盐酸)

储存温度:RT

用蓝盖瓶配置,长期存放在通风橱中,由于盐酸挥发性强,腐蚀性强,因此应该远离金属和易腐蚀的物品。

配置方法(200 mL):【浓盐酸为12 mol/L】

向250 mL的蓝盖瓶中加入33 mL浓盐酸,一定要用量筒在通风橱中开通风量取,不得使用移液枪。

再向蓝盖瓶中加入167 mL蒸馏水。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

0.1 M硫酸镍

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取3.1 g硫酸镍,加入到500 mL的烧杯中,加入200 mL的蒸馏水溶解。

将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净,利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤,过滤两遍。

将过滤后的硫酸镍溶液加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

100 g/L 氯化铵

储存温度:RT(如果发现有絮状沉淀,利用布氏漏斗过滤,装回原瓶)

配置方法(400 mL):

称取40 g氯化铵,加入烧杯中,加入300 mL整理水溶解,定容至400 mL。将布氏漏斗用蒸馏水清洗干净,利用两层滤纸对溶解的盐酸胍进行过滤,过滤两遍。

将过滤后的硫酸镍溶液加入到500 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

2M MgCl2

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取19.04 g无水氯化镁,加入到500 mL的烧杯中,加入180 mL的蒸馏水溶解,利用量筒定容至200 mL。

加入到500 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

5 M NaCl

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取58.4 g氯化钠,加入到500 mL的烧杯中,加入180 mL的蒸馏水溶解,利用量筒定容至200 mL。

加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

50% TCA

储存温度:RT

配置方法(200 mL):

称取100 g三氯乙酸,加入到洗净的500 mL的烧杯中,加入100 mL的超纯水溶解,利用量筒定容至200 mL。

加入到250 mL的蓝盖瓶中。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

DNS试剂

储存温度:RT

配置方法(1000 mL):

称取DNS药品3.15 g,氢氧化钠10.5 g,酒石酸钾钠91.0g,于磁力搅拌器上加热且搅拌溶到500 mL蒸馏水中,待溶解后再加入2.5 g重蒸酚(不要用苯酚)和2.5 g亚硫酸钠,继续搅拌溶解,待冷却至室温后,定容至1000 mL。存放于棕色瓶中,7天后使用,有效期6个月。

做标记:

用美纹纸标签进行标记,写明配置人和配置时间

菌落PCR细胞裂解液

用于酵母菌、菌丝体、子实体的菌落PCR用

储存温度:RT

配置方法(500 mL):

取2.5 mL Triton X-100、1 g NaOH、1 mL 0.5 M EDTA溶液加入到500 mL的烧杯中,加蒸馏水,定容到500 mL。装入500 mL蓝盖瓶。

分装部分到100 mL蓝盖瓶中使用。

称取DNS药品3.15 g,氢氧化钠10.5 g,酒石酸钾钠91.0g,于磁力搅拌器上加热且搅拌溶到500 mL蒸馏水中,待溶解后再加入2.5 g重蒸酚(不要用苯酚)和2.5 g亚硫酸钠,继续搅拌溶解,待冷却至室温后,定容至1000 mL。存放于棕色瓶中,7天后使用,有效期6个月。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

专用试剂IM诱导培养基储藏液100×K-buffer

准确称取K2HPO4 40 g,KH2PO4 29 g,加入到烧杯中,加入180 mL超纯水溶解,利用NaOH调pH至7.0,定容到200 mL。

加入到250 mL蓝盖瓶中,做好标记。

100×M-N buffer

MgSO4•7H2O 12.0 g,NaCl 6.0 g,补超纯水并定容至200 mL。

加入到250 mL蓝盖瓶中,做好标记。

100× FeSO4 (0.01% w/v)

称取20 mg硫酸亚铁,加入到250 mL蓝盖瓶中,加入200 mL超纯水溶解。

做好标记。

100× (NH4)2SO4 (5% w/v)

称取10 g硫酸铵,加入200 mL蒸馏水溶解,利用布氏漏斗过滤(垫2层滤纸)2遍。

加入到250 mL蓝盖瓶中,做好标记。

100× Glycerol (50% v/v)

用量筒量取100 mL甘油,加入250 mL蓝盖瓶,再用100 mL超纯水将量筒中甘油溶解转移到蓝盖瓶中。

1000×CaCl2(1% w/v)

准确称取2 g 氯化钙加入250 mL蓝盖瓶中,加入200 mL超纯水,溶解。

做好标记。

10×DNA loading Buffer

琼脂糖凝胶电泳上样loading

储存温度:RT/-20℃

配置方法(10 mL):

向15 mL的螺口离心管中加入4 mL超纯水、0.5 mL 10% SDS溶液、0.2 mL 0.5M EDTA、25 mg 溴酚蓝(可以再加入25 mg二甲苯晴或者加入10 mg的永固橘黄G染料)。混匀后,用移液枪取3.9 mL的甘油加入到离心管中。利用离心管上面的刻度定容至10 mL。

做标记:

离心管上写明配置的试剂是什么

SDS-PAGE相关试剂配置10×Protein loading Buffer

SDS-PAGE上样loading,用于SDS-PAGE检测过程中帮助样本蛋白进入胶孔中。

储存温度:RT/-20℃

配置方法(10 mL):

向15 mL的螺口离心管中加入1 mL 0.5M Tris-HCl(pH 6.8)缓冲液、2 mL 10% SDS溶液、10 mg溴酚蓝、7 mL甘油,利用超纯水定溶至10 mL。

涡旋混匀后分装,留1管放在室温下,其余放到-20℃保存。

配置过程中不需要加入β-mercaptoethanol或者DTT,在进行SDS-PAGE上样前如果样本蛋白没有加入DTT,可以加入1 mM的DTT(1 M的DTT储藏液在-20℃)

做标记:

离心管上写明:10×蛋白Loading

4×分离胶Buffer (pH 8.8)

储存温度:4°C

配置方法(200 mL):

1.5 M Tris-HCl,pH 8.8

称取36.4 g Tris-base 溶于160 mL超纯水,利用浓盐酸调节pH至 8.8,加入超纯水定容到200 mL,装入250 mL蓝盖瓶,4°C贮存。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

4×浓缩胶Buffer (pH 6.8)

储存温度:4°C

配置方法(200 mL):

0.5 M Tris-HCl,pH 6.8

称取12 g Tris-base 溶于160 mL超纯水,利用浓盐酸调节pH至 6.8,加入超纯水定容到200 mL,装入250 mL蓝盖瓶,4°C贮存。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

10×电泳缓冲液

储存温度:4°C

配置方法(1 L):

试剂加入顺序很重要!

向1 L或者2L的烧杯中加入30.3 g Tris-base,144 g甘氨酸,10 g SDS,加入800 mL的蒸馏水,利用磁力搅拌器将试剂溶解。

利用量筒定溶至1 L,4°C贮存。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

10%(w/v)APS

储存温度:4℃

配置方法(1 mL):

过硫酸铵试剂应该放在4℃。

称取0.1 g的过硫酸铵到1.5 mL的离心管中,将离心管放到4摄氏度(或者-20℃)进行保存。

使用时取出一个离心管加入1 mL的超纯水,并在离心管上写上配置时间,放到4摄氏度保存,新配置的过硫酸铵可以使用1个月,超期需要重新取出一管来进行配置。

做标记:

离心管上写明配置时间(加入超纯水的时间)

SDS-PAGE胶染色液

储存温度:RT

配置方法(1 L):

试剂加入顺序很重要!

将2.5 g考马斯亮蓝R-250先溶解于450 mL甲醇中,完全溶解后,加入100 mL乙酸并混合均匀,最后加入450 mL蒸馏水混合均匀。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

SDS-PAGE胶脱色液

储存温度:RT

配置方法(1 L):

向1 L的量筒中加入250 mL的95%乙醇,再加入80 mL的冰乙酸,加入蒸馏水定溶至1 L。

做标记:

用美纹纸或标签机进行标记,写明配置人和配置时间

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